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本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白与浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的核蛋白与浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白为非变性，有活性，可以用于Western、EMSA、footprinting、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀后破坏细胞膜，释放出浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到核蛋白。本试剂盒可以抽提50个，数量为2×10⁶个Hela细胞(约40mg)。

• 需自备PMSF，PMSF一定要在抽提试剂加入到样品前2～3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
  
• 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
  
• 对于组织样品，本试剂盒仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果差。可以抽提的组织样品数通常不足50个。
  
• 使用本试剂盒抽提得到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白都可以直接用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。

室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的CER A备用，在需要加入前数分钟内加入PMSF至终浓度为1mM。取适当量的NER备用，在需要加入前数分钟内加入PMSF至终浓度为1mM。如果目标蛋白含丰富的半胱氨酸，可在CER A、NER中加入DTT至终浓度0.5mM。

• 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打细胞(最好不用胰酶消化，因为可能降解蛋白)。500×g离心2～3分钟，尽可能吸弃上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。接步骤4。
  
• 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500×g离心2～3分钟，尽可能吸弃上清，留下细胞沉淀备用。接步骤4。
  
• 对于新鲜组织：
  
  • 把组织尽可能切成非常细小的碎片。在PBS里面匀浆制成细胞悬液，500×g离心2～3分钟，弃上清，估计细胞沉淀体积，接步骤4。
    
  • 把组织称重后，把组织尽可能切成非常细小的碎片，按照每50毫克组织加入500微升的比例加入CER A，匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，接步骤5。在步骤7按照每200微升CER A加11微升比例加入CER B。
• 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的CER A。
  
  • 对于2×10⁶个Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。
• 最高速剧烈Vortex 15秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。
  
  • 如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长Vortex时间。
• 冰浴10～15分钟。
  
• 加入CER B 11微升。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
  
• 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 14000～16000g离心5分钟。
  
• 立即吸取上清至一预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。
  
  • 千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。
• 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的NER。
  不吸尽上清会污染有细胞浆蛋白。
  
• 最高速剧烈Vortex 15～30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔10分钟再高速剧烈Vortex 15～30秒，共40分钟。
  
• 4℃ 14000～16000×g离心10分钟。
  
• 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。